猪传染性胃肠炎病毒诱导st细胞凋亡的初步研究

【目的】探讨猪传染性胃肠炎病毒(tgev)感染猪睾丸细胞(st细胞)后是否可诱导细胞发生凋亡，并对凋亡的信号通路进行初步探究，为进一步揭示tgev的致病机制提供理论基础。【方法】用tgev感染对数生长期的st细胞，同时设立对照组，在感染后不同时间取细胞样品，通过细胞形态观察、细胞活性检测、细胞凋亡率检测和细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9活性检测及westernblot分析等方法，研究tgev感染对st细胞的影响。【结果】tgev感染可抑制st细胞生长，并且呈现病毒感染剂量和感染时间的依赖性。倒置显微镜和荧光显微镜观察结果显示，10moi（感染复数）的tgev感染24h后，st细胞出现典型的凋亡特征，细胞皱缩变圆、聚堆，细胞核内染色质固缩。流式细胞仪检测及caspases活性检测表明，感染tgev的st细胞凋亡比例随感染时间的延长而逐渐增加，细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性逐渐升高。westernblot分析表明，caspase-3、caspase-8和caspase-9无活性的酶原形式随着tgev感染时间的延长逐渐降解，同时caspase-3、caspase-8和caspase-9的活化片段逐渐增加。tgev感染能够促进fasl和bax的表达而下调bcl-2的表达。【结论】tgev感染能够诱导st细胞凋亡，caspase-3、caspase-8和caspase-9及fasl介导的死亡受体通路和bcl-2家族调控的线粒体凋亡通路，在调控tgev感染诱导的细胞凋亡过程中可能起着非常重要的作用。