肿瘤血管生成抑制因子arresten基因克隆及其对烟草的转化

肿瘤血管生成抑制因子arresten是人ⅳ型胶原蛋白α1链羧基末端nc1结构域多肽片段,可抑制新血管生成。研究拟实现该基因对烟草细胞的转化,为进一步利用植物细胞表达该蛋白奠定基础。①采用rt-pcr法从人胎盘组织克隆arresten基因cdna,克隆产物经酶切后定向插入到植物双元表达载体pcambia1301的ncoⅰ和bsteⅱ位点之间,构建成含有目的基因的植物表达载体pca,经pcr、限制性内切酶检测及序列测定正确后,转化根癌农杆菌lba4404,获得携带目的基因的重组农杆菌。②采用叶盘转化法,以重组农杆菌转化烟草。在hygromycin选择压力下获得烟草转化不定芽和完整植株,经pcr检测初步证实,arresten基因已导入烟草基因组中。该研究首次将arresten基因导入高等植物基因组中,为避免利用原核细胞或动物细胞表达arresten的潜在问题,以及进一步利用植物进行该基因的大规模廉价表达奠定了基础。