一步法多重rt-pcr禽流感病毒分型诊断法的建立与应用

根据禽流感病毒（aiv）的m基因序列设计合成了1对aivm基因的通用诊断引物amd1/amd2，针对h5n1、h9n2两种亚型的m基因分型设计合成了2对分型诊断引物h5d1/h5d2，h9d1/h9d2。采用一步法多重rt-pcr技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法，并对其特异性和灵敏度进行验证。结果表明，该诊断方法速度快，一般只需要28～30h即可鉴定出结果，比病毒分离鉴定（5～7d）至少缩短4～6d；特异性强，试验组53株aiv全部扩增出与预期同样长度的目的条带，与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致。对照组中新城疫病毒（ndv）、减蛋综合征病毒（eds76v）、传染性支气管炎病毒（ibv）均未扩增出特异性基因条带,；灵敏度高，试验组将aiv接种spf鸡胚，培养后的鸡胚尿囊液（aaf）进行10-2稀释后，仍可以检测到其中的aiv。