口蹄疫病毒vp1基因在胡萝卜中的表达

为了生产一种可以直接口服的口蹄疫疫苗,以胡萝卜(daucuscarotal.var.sativa)无菌幼苗下胚轴诱导的愈伤组织为受体材料,通过农杆菌lba4404介导的遗传转化,在camv双35s启动子的驱动下,将口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)结构蛋白vp1基因的活性肽片段(包括2个141~160位肽和1个200～213位肽的基因片段)导入胡萝卜愈伤组织细胞。经pcr和pcr-southern杂交等方法鉴定转化苗,确认口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因已整合到胡萝卜染色体中,转化效率达到52%。sds-page试验结果初步证明,在转化苗总蛋白中有目的基因表达,胡萝卜种子中可溶性蛋白含量最高,达3.57g/l,而根中可溶性蛋白含量最低,仅有0.17g/l;靠近心叶的叶片可溶性蛋白含量可达到1.475g/l,而最外部叶片可溶性蛋白含量仅有0.37g/l,相差近5倍。dot-elisa和elisa检测结果表明,转化苗中表达的口蹄疫病毒结构蛋白vp1可以与fmdv灭活疫苗免疫动物制备的抗体特异结合。以上试验结果证明,口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因在转基因胡萝卜中表达成功。