超甜玉米转基因稳定高效再生体系的建立及转化植株pcr分析

为了通过对影响超甜玉米再生因素的研究,建立超甜玉米转基因再生技术体系,获得抗虫资源。以超甜玉米幼胚为愈伤组织诱导外植体,利用基因枪法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转化胚性愈伤组织,通过优化再生和生根培养条件建立了稳定、高效的超甜玉米转基因再生成株体系。结果表明,随着愈伤组织继代时间的延长,再生成苗率降低,再生成苗越难;除草剂basta对愈伤组织筛选的最适质量浓度为8mg/l,愈伤组织预分化的最适培养基为ms40g/l蔗糖20g/l甘露醇5.0mg/laba,最适的再生培养基为ms20g/l蔗糖2.0mg/l6-ba0.1mg/lnaa,生根培养基为1/2ms0.1mg/lnaa,对生根不好的小苗附加0.1mg/lnaa2.0mg/liba或0.2mg/lnaa3.0mg/liba可以促进生根,生根率达93%以上。对部分再生转化植株进行pcr分析,部分植株能够扩增出426bp片段,与阳性对照大小相同。试验结果初步证明bt基因已经导入到玉米植株中。