草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化

通过pcr扩增,从pcambia1300-bar质粒中获得bar基因编码区全长,经酶切鉴定和测序后证实,bar基因分离成功。用bamh和hind酶切,将bar基因与原核表达载体pet28a(+)连接,构建成重组质粒pet28bar。将重组质粒pet28bar转化大肠杆菌菌株bl21(de3)后,获得高效表达。sds-page电泳分析显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白质分子量约为27ku。将包涵体离心、洗涤和纯化后,得到高纯度的目的蛋白。该蛋白可以替代植物外源蛋白进行转bar基因产品的食用安全性检测,也可用于转bar基因产品elisa检测的抗体制备。