枯草芽孢杆菌bioi基因的克隆和高效表达及bioi蛋白的纯化

【目的】克隆和表达枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)bioi基因并纯化表达产物。【方法】提取b.sub-tilis1a747基因组dna,从中扩增bioi基因并将其克隆到大肠杆菌(escherichiacoli)的表达载体pet-28a(+)上,构建bioi的表达载体pet28a-bioi。将重组质粒pet28a-bioi电转化到大肠杆菌表达宿主bl21(de3)中进行iptg诱导表达,对表达产物bioi用ni2+-nat亲和层析树脂进行纯化,并对纯化蛋白进行波长扫描。【结果】成功构建了表达载体pet28a-bioi,酶切鉴定结果正确并在大肠杆菌中表达成功,经iptg诱导8h后,重组蛋白bioi的表达量占总可溶性蛋白的20%;波长扫描发现,重组蛋白bioi在400nm处有特征吸收峰。【结论】bioi基因克隆表达成功,其表达产物bioi具有p450蛋白的特征,为蛋白性质的进一步研究和抗体的制备奠定了基础。