利用t4快速检测t4宿主型大肠杆菌初探

【目的】建立一种定量检测噬菌体宿主菌的简捷方法。【方法】按体积比1∶9将4.4×109pfu/ml的t4工作液和已知活菌浓度的t4宿主型大肠杆菌工作液混合形成模拟样品,立即在37℃150r/min下作用5min完成侵染,接着采用离心、微滤分离技术清除样品中直径0.22μm以下的物质(包括游离t4),同时将颗粒物(包括受侵染的大肠杆菌)截留在微滤膜中。待受侵染大肠杆菌裂解后,用sm缓冲液将子代t4从微滤膜中洗滤出来,收集滤液得到转换样品。通过噬菌斑计数法测出转换样品子代t4数量,分析其与模拟样品t4宿主型大肠杆菌活菌数量的定量关系。【结果】模拟样品t4宿主型大肠杆菌活菌数的对数和转换样品子代t4数量的对数呈一元线性关系;参试菌株和试验条件决定着方程的斜率和截距。【结论】按照上述方法转换样品,并根据转换样品子代t4数量和上述一元线性关系,可以快速测定样品中t4宿主型大肠杆菌的活菌含量。