h9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

【目的】获得表达h9亚型禽流感病毒血凝素(ha)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子lp2ep2驱动的ha基因,插入到禽痘病毒转移载体psy681中,获得重组转移载体psy681/ha。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒s-fpv-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达ha的重组禽痘病毒rfpv-ha。在含有x-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中ha的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒dna为模板,利用ha基因特异引物进行pcr,扩增出1条约1.7kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达ha。【结论】成功构建了表达h9亚型禽流感病毒ha基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的ha。