牛病毒性腹泻病毒陕西株的分离与ns5b基因序列测定

【目的】分离并鉴定陕西省牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldiarrheavirus,bvdv)。【方法】采集腹泻犊牛的肠系膜淋巴结,处理后接种于mdbk细胞,盲传,逐日观察是否有细胞病变产生。采用病毒蚀斑技术对病毒克隆纯化后,提取其rna,进行rt-pcr鉴定。将扩增的ns5b基因克隆入pmd18-t载体中,采用碱裂解法小量提取质粒,并对质粒进行ecorⅰ和salⅰ双酶切、salⅰ单酶切及pcr鉴定,对阳性克隆进行核苷酸序列测定及分析。采用病毒蚀斑试验测定分离毒株的半数组织培养感染量(tcid50)。【结果】盲传4代后细胞出现典型、规律的细胞病变。rt-pcr扩增出预期长度(360bp)的基因片段,核苷酸序列分析结果表明,所扩增的基因为牛病毒性腹泻黏膜病病毒ns5b基因,其与bvdvvedevac株ns5b基因核苷酸序列有99%同源性。bvdv陕西株的半数组织培养感染量(tcid50)为3.6。【结论】成功分离了牛病毒性腹泻病毒陕西株,为陕西省bvdv的防治提供了理论依据。