微弹轰击小麦幼胚愈伤组织的影响因素研究

【目的】优化小麦基因枪转化技术体系，为提高小麦基因枪转化效率提供参考。【方法】以小偃22为材料,采用基因枪法分析小麦幼胚愈伤组织诱导时间、微弹轰击金粉用量及筛选分化培养基类型对基因枪遗传转化频率的影响，并对转化植株进行了检测。【结果】在相同条件下，小麦幼胚经过9d的愈伤组织诱导时再生植株率最高，达到4.24%；同一条件下，金粉用量为60μg/枪的再生植株率最高，达到3.90%；使用1/2ms培养基添加naa1.0mg/l和kt1.0mg/l进行转化细胞筛选与分化的效果最好，再生植株率为3.72%；对转化抗性再生植株的特异pcr检测表明，目的基因已整合到小麦染色体组中。【结论】小麦幼胚通过9d的愈伤组织诱导，基因枪轰击金粉用量为60μg/枪，使用筛选分化培养基1/2ms+kt1.0mg/l+naa1.0mg/l+双丙氨膦2.0mg/l+蔗糖30g/l+ag5.0g/l进行转化细胞的筛选与分化，可获得较高的抗性再生植株率。