秦岭野生蕙兰rapd反应体系的优化

【目的】建立适宜于秦岭野生蕙兰rapd分析的pcr反应条件，为利用rapd技术研究秦岭野生蕙兰的遗传多样性提供技术依据。【方法】以秦岭野生蕙兰叶片为材料，采用改良ctab法，提取野生蕙兰基因组dna进行rapd扩增反应。以5′-ccttgacgca-3′（s12）为随机引物，通过l16(45)正交试验与单因素试验2种方法，对rapd反应体系的主要参数（mg2+浓度、dntps浓度、模板dna用量、引物浓度、taqdna聚合酶用量）进行摸索和优化，并经过验证试验，建立适合秦岭野生蕙兰的rapd遗传多样性分析体系。【结果】研究得到的适于秦岭野生蕙兰的rapd遗传多样性分析体系为：25μl反应体系中，mg2+浓度为2.5μmol/l，dntps浓度为0.16mmol/l，模板dna用量为100ng，引物浓度0.6μmol/l，taqdna聚合酶用量为1.5u。各因素对rapd反应的影响程度依次为：模板dna用量>引物浓度>taqdna聚合酶用量>dntps浓度>mg2+浓度。【结论】优化的秦岭野生蕙兰rapd反应体系扩增效果比较理想，扩增条带的多态性明显、清晰度高、重复性好，可用于进一步的遗传多样性分析。