鸡plam2基因的克隆与原核表达及pla2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡plam2基因，小量制备鸡pla2卵黄抗体，为大规模制备pla2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总rna，利用rt-pcr方法获得鸡plam2基因，将其克隆至pgex-4t-1原核表达载体中，构建表达载体pgex-4t-1-pla2，转入大肠杆菌bl21(de3），iptg诱导表达gst-pla2融合蛋白。将gst-pla2融合蛋白免疫青年蛋鸡，每次0.3mg/只，共免疫4次，收集鸡蛋，提取卵黄抗体，采用westernblotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡plam2基因，构建了pgex-4t-1-pla2原核表达载体，并诱导表达了分子质量为44.59ku的gst-pla2融合蛋白。gst-pla2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体，经westernblotting检查，制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡plam2基因的表达系统，并成功的制备了抗鸡pla2的卵黄抗体。