猪淋巴结pkr基因的克隆与体外初步表达

【目的】克隆猪淋巴结双链rna激活的蛋白激酶（pkr）基因，并在体外初步表达，为研究流感病毒感染时猪pkr与p58ipk在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用trizol法从猪淋巴结中提取总rna，rt-pcr法扩增猪pkr基因的完整编码区，将该片段连接到原核表达载体pgex-4t-1和真核表达载体pdsred1-n1中，采用sds-page检测原核表达载体pgex-pkr在大肠杆菌bl21中的表达情况，用脂质体转染法将真核表达载体pdsred1-pkr转入猪脐静脉血管内皮细胞系（suvecs），westernblot检测其在细胞中的表达。【结果】pcr扩增得到了1754bp的dna片段，与预期结果一致；原核表达载体pgex-pkr和真核表达载体pdsred1-pkr经双酶切和核酸测序分析，表明载体构建成功；sds-page检测结果表明，pgex-pkr重组质粒在大肠杆菌中成功表达；westernblot检测到pdsred1-pkr重组质粒在suvecs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结pkr基因，并在体外初步表达成功。