环丙沙星单克隆抗体的制备

【目的】制备环丙沙星(crprofloxacin，cpfx)单克隆抗体(monoclonalantibody,mab)，并对其免疫学特性进行鉴定，为畜产品cpfx残留的快速检测提供技术支持。【方法】采用碳二亚胺法(edc)，将载体蛋白牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,bsa)和鸡卵白蛋白(ovalbumin,ova)分别与cpfx偶联合成免疫抗原cpfx-bsa和包被抗原cpfx-ova，经紫外(uv)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）鉴定后免疫balb/c小鼠，应用细胞融合技术筛选分泌cpfxmab的杂交瘤细胞株，采用体内诱生腹水法制备cpfxmab，并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】uv和sds-page鉴定结果表明，人工抗原偶联成功；免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1∶105左右，其中4号小鼠血清cpfx抑制效价较高且ic50最低(17.21μg/l），融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞，命名为3d2。3d2细胞培养上清效价为1∶(1.28×103)，腹水效价为1∶(1.6×105)。cpfxmab对cpfx的ic50为9.95μg/l，对恩诺沙星的交叉反应率为128.39%，与其他同系的喹诺酮类抗生素的交叉反应率很低。【结论】获得了高效价、敏感、特异的抗cpfxmab，为cpfx残留的快速检测奠定了技术基础。