美洲棉铃虫cyp321a1基因启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体的构建及活性测定

【目的】构建美洲棉铃虫细胞色素p450基因cyp321a1启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体，为探索cyp321a1基因的转录调控机制奠定基础。【方法】设计合成pcr引物,从美洲棉铃虫基因组dna中扩增并克隆cyp321a1基因的启动子区；将克隆的启动子片段插入载体pgl3-basic构建萤火虫荧光素酶报告基因载体p(-1470/+64)；用p(-1470/+64)转染美洲棉铃虫脂肪体细胞系bcirl-hzfb33，并用双荧光素酶报告基因检测系统分析该启动子活性。【结果】p(-1470/+64)经双酶切、pcr鉴定及dna测序分析鉴定准确无误；通过转染细胞和荧光素酶活性分析，证实所构建的重组载体p(-1470/+64)可以反映cyp321a1启动子活性；黄酮、花椒毒素处理极显著地增强了重组载体p(-1470/+64)的荧光活性。【结论】成功构建了美洲棉铃虫细胞色素p450基因cyp321a1启动子区萤火虫荧光素酶报告基因载体，cyp321a1启动子活性可以被植物次生物质黄酮、花椒毒素高度诱导。