牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ的原核表达与纯化

【目的】建立牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ（vacciniatopoisomeraseⅰ）的原核表达体系及纯化方法，以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ。【方法】优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ的全基因序列，构建牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ的原核表达载体（pet28a/topo）并转化e.colibl21star（de3）菌株，优化其诱导表达条件，表达蛋白经talonhistagpurificationresin螯合层析柱纯化，用sds-page鉴定纯化效果，借助酶切质粒pllp-ompa检测纯化蛋白的活性。【结果】转化pet28a/topo的e.colibl21star（de3）特异地表达了牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ蛋白，最佳诱导条件为30℃下以0.5mmol/liptg诱导12h。该蛋白经钴离子螯合层析柱纯化后，sds-page电泳结果显示其为分子质量36ku的蛋白。酶切和冻融试验结果表明，该酶具有高活性和高稳定性。【结论】成功构建了牛痘病毒拓扑异构酶ⅰ的原核表达和纯化体系，为后续拓扑异构酶ⅰ的应用研究奠定了基础。