金黄色葡萄球菌coa基因的克隆、表达及生物活性检测

【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(coa)基因，并在大肠杆菌中进行融合表达，分析重组蛋白的生物活性。【方法】用pcr法扩增金黄色葡萄球菌coa基因，构建coa基因原核表达载体pet32a（+）/coa，在大肠杆菌bl21（de3）中进行诱导表达，采用sds-page法分析重组蛋白的表达水平；将重组蛋白纯化后，测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2106bp的coa基因，其包含1个完整的开放阅读框，编码含701个氨基酸的成熟多肽；iptg诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100ku，目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%；纯化的重组蛋白含量为0.047mg/ml，其对兔血浆凝固效价为0.012mg/ml。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌coa基因，coa凝固血浆效价为0.012mg/ml。