抗o型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

[目的]针对o型口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)制备特异性的单克隆抗体,为进一步研制o型口蹄疫诊断方法提供物质基础.[方法]用纯化的o型口蹄疫病毒免疫balb/c小鼠,取脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,结合间接elisa和间接免疫荧光(ifa)筛选,有限稀释法克隆,建立稳定的阳性杂交瘤细胞株,并对制备的单克隆抗体进行生物学特性鉴定.[结果]获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2b9和5f7,抗体亚类鉴定其均为igg1/κ类型;ifa结果显示,2株单克隆抗体仅与o型fmdv反应,不与asia1型fmdv反应,推测其均为抗o型fmdv的型特异性单克隆抗体;westernblot结果显示,2株单克隆抗体均无特异性条带出现,表明其所针对的抗原表位均为构象型表位;相加elisa试验表明,2b9与5f7两株单克隆抗体识别的抗原表位相近或相同;经硫氰酸盐洗脱法测定,2b9和5f7的相对亲和力指数均为1.5mol/l;中和试验显示,2株单克隆抗体都不具有中和活性.[结论]2株单克隆抗体的获得及其生物学性质的鉴定,为o型口蹄疫诊断方法的建立提供了基础材料.