草鱼eif-5a的克隆、组织表达和进化分析

【目的】克隆和鉴定草鱼(ctenopharyngodonidella)的eif-5a基因，并分析其组织表达和适应性进化。【方法】在克隆草鱼eif-5a全长cdna的基础上，利用orffinder、smart等在线软件对草鱼eif-5a的分子特征进行分析，并利用paml3.15软件包中的密码子替换模型检测eif-5a的分子适应性进化；rt-pcr分析eif-5a在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中的本底表达和polyi:c诱导表达。【结果】草鱼eif-5a全长cdna为2249bp，其中包含5′非编码区41bp，3′非编码区1743bp；最大开放阅读框为465bp，编码1个由155个氨基酸残基组成的蛋白质；草鱼eif-5a分子质量为16.856ku，等电点pi为5.18，n端含有eif-5a家族共有的羧腐胺赖氨酸，c端包含一段富含亮氨酸的结构域。草鱼eif-5a与人及其他动物具有较高的同源性，只有少数氨基酸残基发生替换；适应性进化分析也表明，eif-5a不但具有结构的保守性，还具有功能的保守性；eif-5a在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中恒量表达，并且其表达不因polyi:c的诱导而发生变化。【结论】eif-5a是一类与细胞分裂和分化密切相关的蛋白质，在生物体中具有多种剪切体，提示eif-5a对维持细胞生存非常重要；鉴定的草鱼eif-5a为eif-5a1，而非eif-5a2.