山羊血清中cd58间接竞争elisa检测方法的建立

[目的]制备抗cd58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中cd58含量的间接竞争elisa方法.[方法]以纯化的cd58蛋白为抗原免疫balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗cd58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立cd58间接竞争elisa检测方法,对不同生理时期山羊血清中cd58的含量进行检测.[结果]筛选出1株稳定分泌抗cd58单克隆抗体的杂交瘤细胞株g6;玫瑰花环抑制试验和western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对cd58的特异性单克隆抗体;对间接竞争elisa方法的反应条件进行优化后,建立了检测cd58的间接竞争elisa方法,该方法最适可测范围为10～1000000ng/ml,理论最低检测限为3.087ng/ml,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中cd58含量分别为(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/ml,怀孕山羊血清中cd58含量为(61.564±5.10)μg/ml.[结论]建立了山羊血清中cd58间接竞争elisa检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性;对不同生理时期山羊血清中cd58含量的检测表明,怀孕山羊血清中cd58含量显著高于未发情和发情山羊.