β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-rnai表达载体的构建

【目的】构建β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因具有功能性间隔序列的发夹结构（intron-hairpinrnai，ihp-rna）的rna干扰(ihp-rnai)表达载体并转化大豆，为通过rna干扰技术改良大豆的营养品质奠定基础。【方法】以大豆总rna反转录获得的cdna为模板，通过pcr扩增克隆了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的核心保守序列(400bp)，并将该片段的反义和正义片段插入到重组植物表达载体p3301p的种子特异性启动子7αp下游，将功能性间隔序列intron-ssr插入反义片段与正义片段之间，构建α′-亚基基因ihp-rnai安全型表达载体p3301-pfnz-α′-badh，并进行pcr及双酶切鉴定。利用农杆菌介导法将带有p3301-pfnz-α′-badh的菌株转化“吉农27”大豆植株，对转基因植株进行pcr、southern杂交检测，并对转基因植株α′-亚基基因的表达量进行rt-pcr。【结果】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-rnai表达载体p3301-pfnz-α′-badh，利用农杆菌介导法转化大豆得到7株阳性转化植株；southern杂交结果显示，外源基因以1～2个拷贝整合于大豆基因组中；rt-pcr检测表明，β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的表达被明显抑制。【结论】成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-rnai表达载体，获得了α′-亚基基因被明显抑制的转基因大豆植株，为应用基因工程技术进行大豆品质改良奠定了基础。