基于荧光显色的ibvlamp检测方法研究

【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒（ibv）环介导等温扩增（lamp）检测体系，为ibv的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据ncbi中收录的ibv5a+5b基因的8个区域设计了3对lamp引物，通过对反应体系各组分和条件的优化，建立ibvlamp检测方法，并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用sybrgreeni和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂，对ibvlamp检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和pcr方法对临床送检的60份样品同时进行检测，比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了ibvlamp检测方法，该方法能够在等温（63℃）条件下1h内完成反应，具有良好的敏感性和特异性，最低可以检出1拷贝/μl的阳性重组质粒，比普通pcr方法敏感100倍，而对其他病毒检测结果均为阴性。应用sybrgreeni和钙黄绿素/锰离子显色时，阴阳性样品均有强烈的颜色对比，其中0.05mmol/l钙黄绿素与0.6mmol/l锰离子混合液可以用于lamp扩增产物的判断，其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中，lamp和pcr方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的ibvlamp检测方法，该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。