藏鸡ndv的分离鉴定及f基因的遗传进化分析

【目的】探讨藏鸡ndv的毒力和f基因的遗传进化特征。【方法】从采集的藏鸡病料中分离鉴定ndv，通过测定鸡胚平均致死时间（mdt）和1日龄雏鸡脑内接种致死指数（icpi）来确定分离株的毒力。采用rtpcr方法克隆藏鸡ndv分离株f基因，测序后进行序列分析，并进行进化分析。【结果】共分离鉴定出f5、fx10、f20、f74、f75、f17、f72、fh2等8株ndv，其中f17、f72、fh2为强毒株，其余5株为弱毒株。8株病毒f基因orf均为1662bp，编码553个氨基酸，强毒株orf编码产物含有12个半胱氨酸残基，弱毒株有13个半胱氨酸残基，比强毒株在27位(强毒株c27变为r27)多了1个半胱氨酸残基；有6个潜在的糖基化位点。分离的8株ndv与genbank中发表的20株ndv参考毒株比较结果表明，f蛋白氨基酸序列变异位点较多，主要集中在8-30，97-124，45，385-386，402-403，479-494，509-520位氨基酸处，强毒株aa替代较集中，而弱毒株保守区较多且aa替代较分散。分离ndv株之间f基因编码区核苷酸序列同源性为83.5%～99.9%，其中强毒株之间同源性为95.2%～99.4%，弱毒株之间同源性为99.4%～99.9%。分离ndv株之间f基因编码的氨基酸同源性为87.5%～99.5%，其中强毒株之间同源性为95.3%～98.2%，弱毒株之间同源性为98.6%～99.5%。进化分析显示，3株强毒株均为基因ⅶ型，5株弱毒株均为基因ⅱ型。【结论】分离了8株藏鸡ndv，其中3株为强毒株，属于基因ⅶ型；5株为弱毒株，属于基因ⅱ型。