红鳍东方鲀sirt1基因的克隆及其原核表达

【目的】克隆红鳍东方鲀sirtuin1(sirt1)基因编码阅读框(orf)，并对其进行原核表达。【方法】采集红鳍东方鲀脂肪组织，提取其总rna，采用rt-pcr方法扩增和克隆红鳍东方鲀sirt1基因的orf，构建其原核表达载体pet32a/sirt1，并在大肠杆菌rosetta(de3)中进行表达。【结果】红鳍东方鲀sirt1基因orf区由2070个核苷酸组成，编码689个氨基酸。根据红鳍东方鲀sirt1orf核苷酸序列推测的氨基酸序列与其他物种进行比对，发现其与罗非鱼（oreochromisniloticus）、非洲齿鲤（nothobranchiusfurzeri）、科恩氏假鳃鳉（nothobranchiuskuhntae）、斑马鱼（daniorerio）、人（homosapiens）和小鼠（musmusculus）的同源性分别为82%，82%，81%，66%，72%和69%；成功构建了重组质粒pet32a/sirt1，用iptg进行诱导表达，sds-page电泳结果显示，在约105ku处有特异性的蛋白条带出现。【结论】克隆得到红鳍东方鲀sirt1基因的orf序列，并成功对其进行了原核表达。