桔小实蝇p450基因cyp6a41的克隆与表达分析

【目的】克隆桔小实蝇bactroceradorsalis(hendel)p450基因，研究其在不同组织及发育时期的表达情况，探索其可能存在的生理功能。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(rt-pcr)和快速扩增cdna末端(race)技术，克隆桔小实蝇p450基因cyp6a41；采用实时荧光定量pcr（real-timepcr）方法，研究cyp6a41mrna在桔小实蝇不同组织及不同发育时期的相对表达量。采用homology程序模拟构建cyp6a41蛋白的三维结构，应用cdock程序将之与甲酸乙酯、乙酸乙酯、甲基丁香酚3种气味分子进行模拟对接分析。【结果】克隆获得了桔小实蝇p450基因，并命名为cyp6a41。cyp6a41阅读框全长1530bp，编码509个氨基酸，该蛋白序列与桔小实蝇的另外一种p450蛋白cyp4d46序列的一致性最高，达99.2%。荧光定量pcr分析表明，cyp6a41在桔小实蝇不同发育时期都有表达，并且在化蛹第1天表达量达到最高峰；cyp6a41在各组织中也都有表达，但以触角中的表达量最高；雄虫生殖节中的表达量约是雌虫的6.8倍；对接结果表明，cyp6a41蛋白与3种小分子化合物均能形成稳定的复合物。【结论】cyp6a41在桔小实蝇雌雄生殖节中的差异表达，暗示该蛋白在雄虫生殖生理过程中发挥作用；cyp6a41在化蛹第1天及触角中的高表达量暗示cyp6a41不仅参与了蛹早期的发育过程，且可能参与了嗅觉气味分子的降解过程。