smad2介导的activina信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用

【目的】研究smad2在activina促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染smad2基因sirna或者过表达质粒后，收集经activina分别诱导0，6，12，24，48，72，96和120h的细胞各100ng/ml，采用实时定量pcr检测smad2与内中胚层共同前体标记brachyury和内胚层标记sox17的表达，进一步通过western-blot分析activina诱导中smad2和磷酸化smad2（p-smad2）表达的变化。【结果】在activina诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中，干扰smad2后48h时才检测到brachyury强表达，而单纯activina处理组24h就检测到强表达；sox17的表达始终较单纯activina处理组明显降低，因此，干扰smad2直接抑制了activina的诱导作用。而过表达smad2，brachyury和sox17的表达水平较单纯activina处理组明显增加，促进了限定性内胚层的发生；并且在activina诱导过程中，p-smad2的表达水平明显提高，而smad2的表达没有明显改变。【结论】smad2作为关键因子，介导了activina诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化，并转录调控brachyury和sox17的表达；smad2的磷酸化，激活并介导了activina诱导的信号转导通路。