4种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较

【目的】比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞（intestinalepithelialcells,iecs）分离方法的分离效果，建立小鼠iecs的有效分离培养方法，获得小鼠iecs原代细胞，为后续研究做准备。【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶？和中性蛋白酶ⅰ联合消化法以及胶原酶ⅰ和中性蛋白酶ⅵ联合消化法共4种方法分离小鼠iecs并培养，通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的iecs进行细胞特异性鉴定，比较4种方法的分离效果。【结果】组织块培养法所获iecs活力好，增殖能力强，但成纤维细胞污染较严重，细胞纯度低；胶原酶ⅰ和中性蛋白酶ⅵ分离法获得的iecs数量少且细胞增殖能力弱；嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶？与中性蛋白酶ⅰ联合消化法所获得的小鼠iecs纯度较高，原代培养时增殖能力稍弱于组织块培养法，但传代后增殖能力趋于稳定。通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的细胞进行鉴定，结果表明，分离的细胞多数为小鼠iecs。【结论】嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶？与中性蛋白酶ⅰ联合消化法均适合肠道上皮细胞的分离和培养。