抗果蝇组蛋白乙酰转移酶atac2单克隆抗体的制备

【目的】制备抗果蝇组蛋白乙酰转移酶atac2的单克隆抗体，为进一步研究atac2基因的功能提供重要的试验工具。【方法】pcr扩增果蝇atac2蛋白n端前26个氨基酸的编码基因，构建gst-atac2融合蛋白表达载体pgex-atac2。转化大肠杆菌e.colibl21(de3)，进行诱导表达，通过gst亲和层析法纯化gst-atac2融合蛋白。以gst-atac2为抗原免疫8周龄的balb/c小鼠，取脾细胞，与sp2/0骨髓瘤细胞融合，间接elisa法检测阳性孔，经有限稀释法亚克隆，筛选单克隆杂交瘤细胞株，检测抗体的特异性、效价和亚型，并检测其亲和常数。【结果】pcr扩增获得了目的片段。成功构建了gst-atac2融合蛋白表达载体，于37℃下220r/min振摇5h，当iptg终浓度为0.1mmol/l时，gst-atac2在e.colibl21(de3)中高效表达，gst-atac2融合蛋白大小约为30ku，与预期结果一致。获得1株稳定分泌抗atac2抗体的杂交瘤细胞株，命名为1c7。单抗1c7能够特异地识别gst-atac2蛋白，效价为1∶2×105；亚型鉴定表明其重链为igg1，所得单克隆抗体的亲和常数为2×105。【结论】获得了1株特异性好、能够稳定分泌抗果蝇atac2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。