抗zhangfei蛋白单克隆抗体的制备

【目的】制备抗zhangfei蛋白的单克隆抗体，并鉴定其特性。【方法】用zhangfei融合蛋白免疫balb/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与sp2/0融合，筛选出阳性克隆，应用有限稀释法筛选抗zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株；采用腹水诱生法制备单抗腹水，用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体；采用间接elisa、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5000以上，细胞融合克隆率为98.96%，阳性克隆率为30.18%，筛选出2株抗zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞，其培养上清效价均达到1∶800，腹水单抗效价分别为1∶105和1∶2×105，亲和常数分别为2.5×106和2.3×106。制备的抗zhangfei蛋白单克隆抗体的亚型均为igg1类型。【结论】制备的抗zhangfei蛋白单克隆抗体具有较高的效价和较强的亲和力，可用于进一步研究zhangfei蛋白在机体中的生理作用。