间接elisa法检测羊促乳素抗体方法的建立

[目的]建立促乳素单克隆抗体制备中筛选阳性分泌细胞的间接elisa检测方法.[方法]用促乳素纯品与freund佐剂免疫6～8周龄雌性balb/c小鼠,初次免疫采用抗原与完全freund佐剂,每2周免疫1次,从第2次开始采用抗原与不完全freund佐剂,免疫4次后尾静脉采血,收集血清制备阳性对照抗体,以未免疫的balb/c小鼠血清为阴性对照,筛选间接elisa法检测促乳素抗体的最佳反应条件,并对单克隆抗体制备中的阳性细胞进行筛选.[结果]间接elisa法的最佳反应条件:血清稀释倍数为1∶200,抗原包被质量浓度为100ng/ml,封闭液为1%牛血清白蛋白,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,酶标抗体作用时间为37℃90min,底物作用时间37℃30min.用该方法检测融合的杂交瘤细胞,最终获得od450为0.875和0.460的阳性细胞株.[结论]建立了检测促乳素抗体的间接elisa检测方法,该方法方便易行.