恩诺沙星单克隆抗体的制备及cielisa试剂盒的研制

[目的]研制快速、灵敏、特异的恩诺沙星残留检测cielisa试剂盒(enr-kit),为动物源性食品中恩诺沙星(enr)残留的快速免疫学检测奠定基础.[方法]通过细胞融合技术制备恩诺沙星单克隆抗体(enr-mab)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产enr单抗,应用enrmab研制enr残留间接竞争elisa(cielisa)快速检测试剂盒,并对其灵敏度、半数抑制浓度(ic50)、特异性、准确度和基质效应性进行检测.[结果]筛选出2株杂交瘤细胞,其单抗亚类均为iggl亚型.4g1-b3杂交瘤细胞株的enrmab间接elisa效价为1∶1.024×106,亲和常数(kα)为9×1010l/mol.enr-kit的线性检测范围为0.05～48.75μg/l,灵敏度0.05μg/l,半数抑制浓度(ic50)为1.31μg/l,与环丙沙星的交叉反应率(cr)为0.02%,与其他化合物的交叉反应率(cr)均<0.01%.enr-kit对牛奶样,鱼肉样和鸡肉样中enr的平均添加同收率分别为96.49%,86.95%和84.13%,平均变异系数均<10%,不同基质对enr-kit检测结果影响小.[结论]研制的enr-kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合enr残留快速检测的推广应用.