蓝细菌分离dnae内含肽的自我剪接研究

[目的]证实蓝细菌anabaenasp.pcc7120复制酶中分离的dnae内含肽的自我剪接活性.[方法]分别将anabaenapcc7120中分离的2个dnae基因的部分序列克隆到表达载体上,获得重组表达质粒,经超量表达和纯化后,免疫家兔获得相应的抗体;同时,两段分离的dnae序列被克隆到同一表达载体,构建双重组表达质粒,两段序列具有各自的orf,但由同一启动子调控.双重组表达质粒经诱导之后,利用以上获得的抗体对含有内含肽的dnae蛋白在大肠杆菌表达体系中的自我剪接反应进行检测.[结果]在双重组表达质粒的表达产物中,抗体不仅可以分别与对应的蛋白质反应,而且还可以同时识别1条新条带,该条带的表观分子量与成熟dnae的理论值大致相符.[结论]蓝细菌分离的dnae内含肽在大肠杆菌表达体系中可以进行自我剪接;本研究中获得的抗体具有较好的特异性,无明显背景干扰,而且效价高,抗体可以稀释1000倍以上使用,也可以用于相关方面的研究.