黄颡鱼神经肽y基因(npy)cdna全序列的克隆及其表达特征分析

【目的】克隆黄颡鱼神经肽y基因(npy),研究其在不同组织及在饥饿情况下脑组织中的表达情况，探讨其在黄颡鱼摄食活动中的作用。【方法】利用rt-pcr和race技术，克隆黄颡鱼npy基因的cdna序列全长，对其编码氨基酸进行生物信息学分析；利用半定量pcr和实时荧光定量pcr技术，对npy基因在黄颡鱼成体不同组织(脑、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、胃、肌肉、鳃、性腺)中的表达情况进行研究，并检测饥饿不同时间(0,24，48，72，96，120，144和168h)以及饥饿168h重新投饵1，3和5h后黄颡鱼脑组织中npy表达水平的变化。【结果】黄颡鱼npy基因cdna序列全长772bp，开放阅读框282bp，编码93个氨基酸，其与瓦氏黄颡鱼同源性最高(97%)，与斑点叉尾鮰、建鲤、胭脂鱼、中华倒刺鲃的同源性分别为87%，72%，72%和70%。npy基因在黄颡鱼成体组织脑、脾脏、肝脏、鳃、性腺中都有表达，而在心脏、肌肉、胃、肾脏中不表达，在脑中的表达量极显著高于其他组织(p＜0.01)；在饥饿处理24~144h时,随饥饿时间的增加,黄颡鱼脑组织中npy表达量升高，但在饥饿168h重新投饵3h后,npy表达量即可下降到正常水平。【结论】npy基因在黄颡鱼脑中大量表达，随着饥饿时间的增加脑组织中npymrna表达量上升，重新投饵后其表达量很快下降到正常水平，表明npy基因在黄颡鱼摄食活动中发挥着重要作用。