秋茄kctip1基因克隆及其对植物耐盐性作用的研究

【目的】从秋茄中克隆液泡膜水通道蛋白kctip1基因，并研究其对植物耐盐性的作用机制。【方法】以秋茄幼嫩叶片为材料，通过pcr扩增克隆kctip1基因并构建其表达载体，采用根癌农杆菌介导法，用含重组质粒的农杆菌转化烟草植株，通过卡那霉素筛选和转基因烟草基因组pcr、rt-pcr鉴定，获得转基因再生植株；并选取其中2个阳性株系和野生型株系进行盐处理，测定野生型烟草（对照）与盐处理烟草根、茎、叶鲜质量，光合参数，叶片组织na+、k+浓度以及根尖na+、k+的流速。【结果】成功克隆得到了kctip1基因，对其编码蛋白氨基酸序列进行分析表明，秋茄kctip1包含mip家族的特征序列sgghvnpavt和2个保守的npa(asn-pro-ala)位点。rt-pcr检测结果显示，kctip1基因在转基因烟草株系中成功表达。盐胁迫后，转基因烟草植株根、茎、叶鲜质量，叶片净光合速率，蒸腾速率，叶片组织na+、k+积累和根尖na+、k+内流幅度均高于野生型烟草。【结论】kctip1具有与其他水通道蛋白类似的蛋白结构和酶学功能，kctip1基因过表达可以提高转基因烟草的抗盐能力。