白菜rapd反应条件的优化

以芜菁、大白菜及其杂交1代为试材,系统分析了mgcl2浓度、dntp浓度、随机引物浓度、模板dna用量、taqdna聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对rapd反应的影响,建立了一套稳定的rapd反应体系。该体系反应体积为20μl,mgcl2浓度为1.5mmol/l,dntp浓度为200μmol/l,随机引物浓度为0.4μmol/l,模板dna为20ng,taqdna聚合酶为6.67μmol/(l·min)。在8种热循环条件下,该体系具有稳定的重现性,其扩增程序为:94℃/1′→36℃/20″→72℃/10″预扩增2循环;94℃/10″→36℃/15″→72℃/70″扩增38循环;72℃/4′延伸效果最好