蛇毒纤溶酶alf基因在大肠杆菌中的表达

根据蛇毒纤溶酶(alfimeprase,alf)氨基酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性,设计了14条单链dna,采用重叠延伸pcr方法人工合成了alf基因编码区。通过克隆使其分别连接在融合标签nusa,thioredox-in,skp,histag和信号肽pelb的c端,构建成了多种alf表达载体p43-alf,p25-alf,p32-alf,p15-alf和pskp-alf,转化大肠杆菌后进行了诱导表达,并对表达产物进行了sdd-page分析。实验结果表明,合成的alf基因长度为603bp;构建的表达载体在大肠杆菌中均获得了很好的表达,其中pskp-alf表达量最高,目的蛋白含量高达菌体总蛋白的45%。