枯草芽孢杆菌amyx基因信号肽性能优化研究

从枯草芽孢杆菌1a747菌株基因组克隆amyx基因信号肽序列，构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pygamyx，转化枯草杆菌wb700得wb700（pygamyx）。采用重叠pcr技术，将amyx基因信号肽突变，使其n端正电荷增加，h区疏水性降低，利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pygmut，转化枯草杆菌wb700得wb700（pyomut）。对wb700（pygamyx）和wb700（pygmut）的表达产物进行检测，研究amyx基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响。结果表明，wb700（pygamyx）和wb700（pygmut均能表达β-半乳糖苷酶，wb700（pygamyx）的最高胞外酶活性达2300u，wb700（pygmut）的最高酶活性达5200u。结果表明amyx基因信号肽突变后构建的表达载体pygmut分泌表达β-半乳糖苷酶明显提高,说明β-半乳糖苷酶通过枯草杆菌tat途径分泌表达。