猪gv期卵母细胞玻璃化冷冻保存技术研究

旨在探讨提高猪gv期卵母细胞冷冻保存效率的可能途径。将eds、efs40和es冷冻保护液用作卵母细胞冻前、冻后程序的处理,但不冷冻,比较3种冷冻保护剂对猪gv期卵母细胞的毒性作用;采用es液作玻璃化液,比较常规细管法、ops法和电镜铜网法3种冷冻载体对猪gv期卵母细胞的冷冻效果;并以es液作玻璃化液,ops管为冷冻载体,将猪gv期卵母细胞分5组,即对照组、cb＋离心处理组、直接冷冻组、cb＋冷冻组、cb＋离心＋冷冻组进行对比处理,比较各处理卵母细胞的冻后存活率与发育率。结果表明,在不同冷冻保护液中,以es液组合作为玻璃化冷冻液时的毒性作用最低,与对照组间无明显差异（p＞0.05）;在3种冷冻载体中,用ops法冷冻猪gv期卵母细胞,所获冻后存活率明显高于电镜铜网法和细管法（65.4%对45.0%和38.6%,p＜0.05）,并可获得最佳的冻后成熟率（43.3%）;猪gv期卵母细胞单纯经细胞松弛素b和离心极化处理,不会严重影响卵母细胞的存活,但卵裂率显著低于对照组（39.0%对52.1%,p＜0.05）;细胞松弛素b处理或细胞松弛素b＋离心极化处理后再进行玻璃化冷冻,并不能提高卵母细胞的冻后存活率与发育率。采用ops法直接进行gv期卵母细胞的玻璃化冷冻,可获得7.8%的冻后卵裂率,并能获得桑椹胚发育,是一种有效的猪卵母细胞冷冻保存技术。