秦岭大熊猫ifn-γ基因的表达及其生物活性分析

【目的】探讨大熊猫秦岭种群和四川种群ifn-γ基因的差异，获得具有生物活性的秦岭大熊猫重组γ干扰素蛋白。【方法】采集秦岭大熊猫血样，采用rt-nestedpcr技术扩增秦岭大熊猫ifn-γ基因，将其克隆到表达载体pet32a中，转入dh-5α，进行菌液pcr和双酶切鉴定，经序列测定与分析，构建表达质粒pet32a-ifn-γ，将其转入bl21(de3)受体菌后，用iptg诱导表达秦岭大熊猫ifn-γ蛋白。对重组ifn-γ蛋白进行sds-page电泳、western-blot分析后，用镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白。采用淋巴细胞增殖试验检测重组ifn-γ的活性。【结果】大熊猫秦岭种群和四川种群的ifn-γ基因序列在434位核苷酸处存在差异，秦岭大熊猫的为g，而四川大熊猫的为c；氨基酸序列相同。重组ifn-γ主要以可溶性形式存在，其分子质量为35.3ku，约占菌体总蛋白的20%；纯化的可溶性蛋白经sds-page分析,纯度可达90%以上；重组ifn-γ具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。【结论】获得的重组ifn-γ蛋白表达量高且具有生物学活性。