枸杞issr反应体系的优化与应用

【目的】探索枸杞遗传变异与亲缘关系分析的新方法,为枸杞的种质遗传多样性分析和杂交育种提供了初步理论依据。【方法】以枸杞为试材,对issr-pcr反应中各主要影响因子进行优化筛选，确立枸杞issr-pcr的最佳反应体系；并利用该优化体系，对枸杞的8个品种(系)和5个花药培养再生植株进行种质遗传多样性分析。【结果】枸杞issr-pcr的最佳反应体系为:每25μl反应体系中含10×buffer2.5μl，40ng模板dna，2.0mmol/lmg2+，0.1mmol/ldntps，0.6μmol/l引物，1utaqdna聚合酶；15个引物在13份枸杞种质中共扩增出80个条带，其中多态性条带有61条，多态位点比率为76.3%；13份供试材料可分为2类：一类群含有宁杞1号及其花培植株、宁杞2号及其花培植株、小麻叶、宁杞3号及其花培植株、06-16及其花培植株；另一类群含有04-03-32及其花培植株、04-03-29、北方。从聚类结果来看，宁杞2号、宁杞3号、04-03-32经花药培养所得到的再生植株与母株相比,在dna水平上发生了一定程度变异。【结论】建立的issr-pcr优化反应体系可用于枸杞遗传多样性和基因组研究。