licl诱导大鼠脂肪基质细胞成骨分化研究

【目的】探讨体外培养条件下，licl诱导大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的潜能。【方法】采用ⅰ型胶原酶消化组织块法分离获得大鼠脂肪基质细胞，将其分为处理组和对照组，分别用25mmol/llicl和25mmol/lnacl处理3周，采用形态学、sqrt-pcr、免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色等方法，检测大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的能力。【结果】大鼠脂肪基质细胞在licl诱导24h后，细胞形态由成纤维样变成方块状；诱导3周后，sqrt-pcr检测发现，细胞表达碱性磷酸酶（ap）、ⅰ型胶原（colⅰ）和骨γ羧基谷氨酸(bglap)等成骨细胞特异性基因，与处理0d相比，差异达极显著水平（p<0.01），碱性磷酸酶和茜素红染色均呈阳性，其中茜素红染色阳性率可达60%以上；免疫荧光染色检测结果显示，licl处理3周后细胞表达成骨细胞特异性蛋白osx和opn，阳性率均达70%左右。对照组碱性磷酸酶和茜素红染色均呈阴性，不表达成骨细胞相关基因及蛋白。【结论】大鼠脂肪基质细胞在25mmol/llicl处理下，可分化为成骨样细胞，且表达成骨细胞标志基因及相关蛋白。