新城疫病毒hn09-69株p基因的克隆、序列分析及表达

【目的】对新城疫病毒(ndv)hn09-69株p基因进行克隆、序列分析和表达鉴定，为研究p和v蛋白的功能，及ndv新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以hn09-69株ndv为研究对象，根据genbank上发布的相关p基因参考序列设计引物，进行rt-pcr扩增、克隆和序列测定分析，将p基因的核苷酸序列与相关参考株的p基因序列进行比对分析并构建进化树。将p基因克隆到原核表达载体pet28a(+)中，得到重组质粒rpet28a(+)-p，将重组表达质粒转化到bl21（de3）中诱导表达，用sds-page电泳和westernblotting检测表达情况。【结果】扩增出了hn09-69株p基因的orf，序列长度为1188bp。ndvhn09-69株核苷酸与弱毒株lasota、clone-30同源性分别为82.5%和82.4%，与强毒株f48e8同源性为84.9%，与鸭源，鹅源ndv核苷酸同源性分别为97.9%～98.4%和96.0%～98.0%。sds-page电泳和westernblotting检测结果表明，重组p蛋白分子质量约为54ku,符合预期结果，在大肠杆菌中主要以可溶性的形式表达。【结论】ndvhn09-69株与sdwf-02和sd-09鸭源强毒分离株同源性高，亲缘关系近。重组p蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。