微小隐孢子虫cdna文库的构建与免疫学筛选

【目的】构建微小隐孢子虫cdna文库，以筛选出可替代天然抗原用于诊断的重组抗原。【方法】首先纯化微小隐孢子虫卵囊，用trizolreagent提取总rna，构建全长cdna；分别用蛋白酶k与sfi消化、酶切处理cdna，采用columnspinh-1000分离柱分离cdna，连接λtriplex2载体，构建cdna文库。扩增cdna文库，用兔抗微小隐孢子虫血清作探针对cdna文库进行初筛和复筛，将复筛得到的阳性克隆连接pmd18-t载体，测序后进行序列比对。【结果】微小隐孢子虫cdna文库噬菌斑插入片段长度为1.5kb左右，库容大于107。经过筛选共获得了20个微小隐孢子虫阳性克隆，测序后从中选出了4个主要免疫识别抗原蛋白，分别为mucin蛋白、乳酸脱氢酶、微管相关蛋白和子孢子抗原蛋白。【结论】成功构建了微小隐孢子虫cdna文库，并筛选出了4个主要免疫识别抗原蛋白，为隐孢子虫的血清学诊断提供了重组抗原。