hiv-1可溶性单链抗体b12-scfv的表达与活性分析

【目的】合成并克隆hiv-1单克隆抗体b12的单链抗体基因，在大肠杆菌中诱导表达，并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板，分别扩增其可变区基因片段后，用重叠pcr的方法将二者拼接起来，形成scfv-vl-linker-vh结构，并将其插入pet28a载体，构建原核表达载体petb12-scfv。将petb12-scfv转入大肠杆菌bl21startm(de3)，经iptg诱导表达，对表达产物进行sds-page分析；用ni-nta金属螯合层析柱对表达产物进行分离纯化，用酶联免疫吸附试验(elisa)、荧光显微镜和流式细胞仪(fcm)检测纯化蛋白与hiv-1gp120的结合活性。【结果】得到了b12的单链抗体基因b12-scfv，长度为768bp；sds-page电泳结果显示，b12-scfv表达量较高，蛋白质分子质量约为29ku，主要以可溶性蛋白的形式存在，但也有部分形成不溶的包涵体；纯化后蛋白的产量约为2mg/l；活性检测结果表明，b12-scfv对分泌表达和锚定在细胞膜表面的hiv-1gp120都具有良好的特异性结合活性。【结论】单链抗体b12-scfv可以用于hiv-1受体结合位点的表位检测。