ac-mnpvlef-10在sf9细胞中的表达与定位研究

【目的】研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(acmnpv)晚期表达因子lef-10在宿主细胞sf9中的时空表达及定位，为进一步研究lef-10的功能提供理论基础。【方法】利用不同的特异引物，通过pcr方法扩增lef-10及innatep-lef-10目的片段，将目的片段分别克隆到载体ptriex-sp-gfp上，得到重组质粒ptriex-lef10-gfp和ptriex-innatep-lef10-gfp，经过双酶切检测构建载体。将重组质粒分别与bacmid共转染sf9细胞，用得到的重组病毒分别于4，8，16，24，36h再次感染宿主细胞；用激光共聚焦显微镜观察lef-10的表达及亚细胞定位情况。【结果】在感染早期，lef-10就已开始表达；随感染时间的推移，lef-10逐渐移动至细胞核，且在晚期和极晚期时相，lef-10主要集中于细胞核中。【结论】在天然条件下，lef-10是作为晩期表达因子发挥功能的，并且对其他基因的转录可能起一定的调控作用。