一种从脐血培养高增殖潜能内皮祖细胞的新方法

【目的】建立一种培养脐血高增殖潜能内皮祖细胞（highproliferativepotential-endothelialprogenitorcells，hpp-epcs)的稳定经济的新方法，并将由hpp-epcs增殖而来的内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,epcs）与脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，huvecs)进行体外比较。【方法】分离脐血单个核细胞，接种到纤连蛋白（fibronectin，fn）预处理的器皿中，用含有血管内皮生长因子（vegf）和内皮细胞生长添加物（ecgs）等的mcdb131培养基培养，4d后去除未贴壁细胞，继续培养10～21d后，可以得到hpp-epcs来源的epc克隆；从人脐带中分离huvecs，用含有egf的mcdb131培养基扩增培养；同时分离培养人成纤维细胞（humanembryonicfibroblastcells,hefs）。通过免疫表型、uea1结合试验、matrigel试验、dii-ac-ldl吞噬试验等对分离的脐血epcs进行鉴定，以huvecs为阳性对照，hefs为阴性对照。【结果】1个hpp-epc可在2个月中扩增出108～1010个epcs细胞，在长期体外培养中可以保持正常核型。脐血epcs和huvecs均可表达cd31、cd144、vwf，结合uea1，并能在matrigel上形成毛细血管样结构，也能吞噬dii-ac-ldl。【结论】本研究所建立的新方法能从脐血中高效经济地获得较原始的epcs，并能在体外长期扩增培养，有望成为缺血性疾病细胞替代治疗有效的种子细胞。