鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立

[目的]建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法.[方法]通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数1o%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经cm-sepharosefastflow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(rp-hplc)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度.[结果]共获得鸡抗菌肽粗提物0.270g,经rp-hplc分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰.其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌e.coli078(峰13)、金黄色葡萄球菌s.aureus1056mrsa(峰15)和白色念珠菌c.albicansatcc10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/ml.[结论]该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定.