胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测

[目的]在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肤β4(thymosinβ4,tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定.[方法]将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用pcr两步法扩增得到tβ4基因.将tβ4基因片段克隆至ptxb1载体的ndeⅰ和xhoⅰ酶切位点之间,将重组质粒转化至e.colibl21eodonplus,用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(iptg)诱导表达、几丁质(chitinbeads)亲和层析柱纯化tβ4.然后用mtt法测定tβ4的免疫活性.[结果]经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒ptxb1-tβ4,经sds-page电泳分析表明,重组质粒ptxb1-tβ4在e.colibl21codonplus中高效表达,表达量为30%.将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的tβ4.mtt检测表明,tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/ml.[结论]获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/ml.