鹿茸顶端组织ghr基因的cdna克隆及组织定位

[目的]检测鹿茸顶端组织ghr基因的表达,为鹿茸再生的分子机理研究提供理论依据.[方法]根据genbank已发表的牛、山羊和绵羊生长激素受体(ghr)基因序列,用clustalw软件进行同源性分析,在保守序列设计克隆鹿ghr基因编码序列的引物.以3～4岁健康鹿生长30d的鹿茸顶端组织提取的总rna为模板,利用rt-pcr技术克隆ghr基因的cdna序列;并用原位杂交技术对ghr基因在鹿茸顶端进行组织定位.[结果]成功克隆到了1967bp的序列(genbank登陆号为eu381142),该序列包含ghr基因的全部编码序列.鹿ghr基因与牛、羊、人ghr核苷酸同源性分别为97%,97%和80%,ghr蛋白氨基酸序列同源性分别为97.9%,97.6%和77.3%.杂交结果显示,在皮肤层、间叶细胞层、软骨膜层和软骨层的阳性组均有蓝色杂交信号.[结论]利用rt-pcr技术和原位杂交技术在鹿茸顶端皮肤层、间叶细胞层、软骨膜层和软骨层均检测到ghr的表达.